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本试剂盒适用于从各种植物细胞和实体植物组织，如叶片、根、种子等植物组织中提取细胞核。提取过程简单方便。制备的核不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取得到的细胞核可以直接用于蛋白提取等下游应用。

本试剂盒采用酶法提取，酶法提取制备的植物核，回收率提高，纯度高，保持天然活性，但是耗时较长。非酶法的提取试剂盒提取过程简单方便，速度快，可在1小时内完成，而且绝少交叉污染，但是回收率相比酶法较低。如果需要更加快捷的提取试剂盒，可以选择非酶法的提取试剂盒，对提取速度没有要求的话，可以选择酶法提取试剂盒。请根据实际需要选择试剂盒。

• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含5种独立的蛋白酶抑制剂Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

组分	50T	100T
组份A：植物核提取液A	25mL	50mL
组份B：植物核提取液B	50mL	100mL
组份C：植物核保存液C	15mL	30mL

• 长期不用可以-20℃保存，避免反复冻融。多次冻融会导致失效。
  
• 需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。
  
• 试剂拆封后请尽快使用完。

离心机、振荡器、匀浆机/Dounce匀浆器、涡旋混匀器、PBS、100μm细胞筛

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂。

• 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200～400mg植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎，加入1～2mL PBS后用匀浆机充分匀浆或者加适量PBS后用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
  
• 将匀浆液用100μm细胞筛过滤；
  注：
  ① 没有细胞筛的话，在4℃，稍微静置，让粗纤维，成团组织块等沉降，或者以低于100×g力条件下离心1分钟，收集细胞上清，弃组织沉淀。
  ② 有些含黏液较多的样品可能难以吸取，可以将1mL吸头尖稍微剪掉一点使用。
  
• 将滤液在2000×g条件下离心5～10分钟，收集沉淀。
  
• 在沉淀中加入500μL提取液A，充分混匀。
  注：
  ① 培养细胞1000×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞后用PBS洗涤2次，然后直接加入提取液A重悬。
  ② 大约每300μL细胞压积中加入1mL提取液A。
  ③ 一般加入样本体积的2～3倍体积的提取液A，充分淹没样本即可。
  
• 将细胞悬液置振荡器上37℃或室温振荡12～72小时。
  注：
  ① 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
  ② 没有振荡条件也可以不振荡，中间每隔几小时用移液器吹打混匀即可。
  ③ 不同类型的植物样本需要处理的时间差异较大。拟南芥较易处理，鲜嫩叶片较易处理，年龄小的样本处理时间短。拟南芥嫩叶最短4小时即可。
  ④ 部分细胞壁较厚的植物类型可能需要处理更长时间。可以延长至72小时以上处理以提高核得率。
  
• 在2000×g条件下离心10分钟，弃上清，收集沉淀。
  
• 在沉淀中加入500μL～1mL提取液B，用匀浆器充分匀浆，在匀浆液中补充提取液B至1mL，充分混匀。
  
• 置振荡器振荡5～10分钟。
  注：
  ① 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
  ② 没有振荡条件也可以不振荡，置4℃静置，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
  
• 在2000×g条件下离心10分钟，弃上清，收集沉淀，即为细胞核。
  
• 用细胞核保存液C或者其它相应的缓冲液重悬细胞核，置冰箱备用或直接用于下游实验。
  注：
  ① 可以不用试剂C。
  ② 根据下游实验需要选择重悬液。
  ③ 保存液中的细胞核可以2000×g条件下离心10分钟重新回收。

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